試劑與儀器

HX-400A 型高速中藥粉碎機(jī)：浙江省永康市溪岸 五金藥具廠；HH-6 數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市佳美儀器 有限公司；DF-101S 集熱式磁力攪拌器：金壇市醫(yī)療器 械廠；DZF-6050 型真空干燥箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公 司；UV-1700 紫外分光光度計(jì)：日本島津（中國）有限 公司；AB135-S 電子分析天平：梅特勒-托利多國際貿(mào) 易（上海）有限公司；HZP-L502 數(shù)字型 pH 計(jì)：福州華 志科學(xué)儀器有限公司；5804R 低溫離心機(jī)：美國貝克曼 庫爾特有限公司；SCIENTZ-50F 冷凍干燥機(jī)：寧波新 芝凍干設(shè)備股份有限公司；K9840 自動凱氏定氮儀： 濟(jì)南海能儀器股份有限公司。酸棗仁藥材：安徽亳州藥材市場；堿性蛋白酶 （200 U/mg）、中性蛋白酶 （100 U/mg）、木瓜蛋白酶 （800 U/mg）：上海源葉生物科技有限公司；血清尿素 氮、血乳酸、肝糖原、肌糖原、乳酸脫氫酶、超氧化物歧 化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丙二醛、Na+ -K+ -三磷酸腺 苷酶檢測試劑盒：南京建成生物工程研究所有限公 司；其它試劑均為分析純。

方法

取酸棗仁蛋白，加入蒸餾水溶解配制成 5%的蛋 白溶液，酶占底物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 2%，分別加入堿性蛋 白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶，分別調(diào)節(jié)至最適溫度 和最適 pH 值酶解 3 h，酶解完畢后，將溶液置于 90 ℃ 水浴中滅酶 10 min，8 000 r/min 離心 10 min，取上清 液，凍干得酸棗仁蛋白酶解產(chǎn)物[9]。取脫脂酸棗仁粉末，按 1 ∶ 25（g/mL）的料液比加入 蒸餾水溶解，用 1 mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié)溶液 pH 11， 57 ℃恒溫?cái)嚢杼崛?50 min，3 000 r/min 離心 20 min，過 濾得上清液，用 1 mol/L 的鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液 pH 4，置 于 4 ℃下靜置 2 h，3 000 r/min 離心 10 min，沉淀用水復(fù) 溶，用 1 mol/L 的 NaOH 調(diào)節(jié)溶液 pH 7，透析 48 h，凍 干得酸棗仁蛋白。采用 GB 5009.5—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品 中蛋白質(zhì)的測定》中的凱氏定氮法測定酸棗仁脫脂粉 的蛋白質(zhì)含量，采用福林酚法測定酸棗仁蛋白酶解產(chǎn) 物中蛋白質(zhì)含量，按下式計(jì)算蛋白質(zhì)回收率。